2012-1114
2012-117
1、化凍將血清（FetalBovineSerum，Hyclone）從－20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化凍過夜；也可室溫（或浸于自來水中）化凍，化凍后若不馬上滅活，可以放入4℃冰箱暫時保存；2、滅活①放入室溫的水浴鍋內開始加熱（同時放入一個內裝200ml自來水的血清瓶，插入一根溫度計，溫度監(jiān)控以此為準）；②當溫度計顯示56℃時，控制在此溫度30分鐘±3分鐘；若不小心使溫度上升超過56℃，則：若仍未超過60℃，且時間很短（比如：不超過5分鐘），則仍可使用；若超過60℃...
查看更多2012-112
1、凍存條件：建議采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+該細胞株無血清培養(yǎng)基2、凍存方法：①梯度凍存：4℃——1h；-20℃——30min；-80℃——過夜②使用凍存盒：直接放入-80℃冰箱中過夜（有些細胞不適應此種方法）3、復蘇方法：①打開水浴，將培養(yǎng)基放入水浴中，待其穩(wěn)定至37℃；②細胞從液氮內取出后，應快速將細胞放于37℃水浴中，輕輕振搖，使其溶化，（盡量避免溶化前凍存管脫離水?。虎蹖⑷芑髮⒓毎麅龃鎽乙弘x心，轉速1000rpm，3min,后棄去上清，使細胞重...
查看更多2012-1026
細胞生長要求嚴格的無毒無污染環(huán)境，因此必須注意培養(yǎng)室的清潔衛(wèi)生，保持操作空間的無菌條件。1、培養(yǎng)室應為獨立、封閉的空間。培養(yǎng)室及緩沖間都應保持整潔，不要隨意出入；2、保持超凈工作臺的無菌環(huán)境，每次使用前打開紫外燈照射消毒15—30分鐘；每次使用后將廢棄物清理干凈，各用具規(guī)放整齊，用70%酒精擦凈臺面，再打開紫外燈照射30分鐘以上；3、定期擦洗桌面、地板、清潔培養(yǎng)室，并用0.1%的新潔爾滅溶液消毒；定期打開培養(yǎng)室的大紫外燈，將整個房間進行照射消毒；4、每次打開培養(yǎng)箱前，或手伸入...
查看更多2012-1024
一、康寧Corning1、標準TC處理：培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿為大氣下等離子體處理，滾瓶和培養(yǎng)管為真空等離子體處理，處理的表面帶負電，增加氧原子含量。2、CellBIND處理：是指微波等離子處理，處理效果更好，更親水。二、BD1、BDFalcon處理：為真空等離子處理。2、BDPrimaria處理：為真空等離子體加入氧氣和氨氣混合氣體處理，使表面有含氧和含氮基團。三、Nunc：表面處理專家1、PolySorp：對疏水性分子具有高親和力。2、MediSorp：化學性介于Poly...
查看更多2012-1022
一、細胞系（CellLine）原代培養(yǎng)舞經傳代成功即成細胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系（LineageofCells）所組成。二、細胞株（CellStrain）通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數有限,稱為有限細胞株（finitecellstrain）;如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細胞株（continuouscellstrain）。對于人類腫瘤細胞,在...
查看更多2012-1018
1、擴增：不同的干細胞，其擴增方法不同。如造血干細胞為懸浮培養(yǎng)，而腫瘤干細胞則為貼壁培養(yǎng)的細胞。2、消化：根據細胞耐受性的不同，有多種方法，如機械法，化學法，以及膠原酶、胰酶消化等不同方法。3、凍存：取處于對數期的干細胞,消化,并吹打為單細胞懸液,用2X培養(yǎng)基重懸細胞后，將等體積DMSO逐滴加入細胞懸液中，輕輕吹打混勻，重懸細胞于凍存管中，并置于凍存盒中，凍存盒放入-80℃冰箱。4、分化：鑒定干細胞的一項重要指標就是它的分化能力。一般分化采取加入細胞因子誘導、共培養(yǎng)、小分子刺...
查看更多2012-1016
一、培養(yǎng)用液1、未滅菌的試劑：高壓或過濾除菌。2、物品儲放區(qū)不潔：經常清潔并作滅菌處理。3、消毒過程不標準：檢查高壓滅菌器是否工作正常；過濾后檢查濾膜是否破裂；滅菌后的液體仍需做無菌試驗。4、一次性無菌用品不合格：進行質量檢測或更換供應商。二、取材1、原代組織來源有污染，不要把動物帶入培養(yǎng)室處理；2、可能有污染的組織應在酒精中浸泡30s－1min，在清洗用的PBS中加入抗生素。三、玻璃器皿1、儲存時灰塵或細菌孢子進入－一消毒后的器皿應嚴密包裹，置于無菌物品放置區(qū)；未包裹物品放...
查看更多
當前位置：
