2012-924
一、標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,以溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均...
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2012-921
單克隆抗體問世以來,由于其*的特征已迅速應(yīng)用于醫(yī)學(xué)很多領(lǐng)域。主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。1.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)診斷試劑作為檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的診斷試劑,單克隆抗體以其特異性強(qiáng)、純度高、均一性好等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、放射免疫分析、免疫組化和流式細(xì)胞儀等技術(shù)。并且單克隆抗體的應(yīng)用,很大程度上促進(jìn)了商品化試劑盒的發(fā)展。目前,應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于:①病原微生物抗原、抗體的檢測(cè);②腫瘤抗原的檢測(cè);③免疫細(xì)胞及其亞群的的檢測(cè);④激素測(cè)定;⑤細(xì)胞因子的測(cè)定。單克隆抗體對(duì)抗...
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2012-921
1、試管、燒杯、漏斗等玻璃儀器如無特殊要求,用洗衣粉刷洗內(nèi)壁,自來水沖凈后,純凈水潤洗三次,以內(nèi)壁不掛水珠為準(zhǔn),自然晾干。有效期為七日,過期后使用時(shí)重新洗滌。2、液相色譜、氣相色譜使用的進(jìn)樣瓶洗滌方法和原則與滴定管相同。3、效價(jià)用雙碟用完后,先浸入來蘇水中24h,取出超聲20分鐘,自來水逐個(gè)沖凈,純凈水潤洗后,以碟上不掛水珠為準(zhǔn)自然晾干,裝入桶內(nèi)。160℃干烤2小時(shí)滅菌備用。有效期為七日,過期后使用時(shí)重新160℃干烤2小時(shí)即可。4、微生物限度測(cè)定用三角瓶、刻度吸管、試管、雙碟...
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2012-912
抗體的L鏈?zhǔn)怯蒀、V、J三個(gè)基因簇編碼的,H鏈由C、V、D、J四個(gè)基因簇編碼的。是編碼可變區(qū),300個(gè)種類;編碼高變區(qū),有15~20個(gè)種類;編碼連接V、V有DJC的結(jié)合區(qū),4~5個(gè)種類;編碼恒定區(qū),有C僅有一種。這些外顯子通過多種多樣的重排,所合成出的肽鏈,還要再進(jìn)一步進(jìn)行L和H鏈組合,這樣zui后生成的抗體種類就非常多了??贵w基因重排是發(fā)生在淋巴細(xì)胞分化的時(shí)候。按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能,可將其分為IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五類。1、IgM抗體是免疫應(yīng)答中首先分泌的...
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2012-910
1、微波爐加熱在微波爐里加熱0.01枸櫞酸鈉緩沖液(pH6.0)至沸騰后將組織芯片放入,斷電,間隔5-10分鐘,反復(fù)1-2次。2、高壓熱修復(fù)在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01m枸櫞酸鈉緩沖溶液(pH6.0).蓋上不銹鋼鍋蓋,但不能鎖定。將玻片置于金屬染色架上,緩慢加壓,使玻片在緩沖液中浸泡五分鐘,然后將蓋子鎖定,小閥門將會(huì)升起來。10分鐘后除去熱源,置入涼水中,當(dāng)小閥門沉下去后打開蓋子。此方法適用于較難檢測(cè)或核抗原的抗原修復(fù)。(骨及軟骨組織的標(biāo)本選擇較溫和的微波加熱...
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2012-97
一、化凍將血清(FetalBovineSerum,Hyclone)從-20℃冰箱取出,放于4℃冰箱化凍過夜;也可室溫(或浸于自來水中)化凍,化凍后若不馬上滅活,可以放入4℃冰箱暫時(shí)保存;二、滅活1、放入室溫的水浴鍋內(nèi)開始加熱(同時(shí)放入一個(gè)內(nèi)裝200ml自來水的血清瓶,插入一根溫度計(jì),溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn));2、當(dāng)溫度計(jì)顯示56℃時(shí),控制在此溫度30分鐘±3分鐘;若不小心使溫度上升超過56℃,則:若仍未超過60℃,且時(shí)間很短(比如:不超過5分鐘),則仍可使用;若超過6...
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2012-95
1、常規(guī)方法將細(xì)胞消化成單細(xì)胞懸液;2、轉(zhuǎn)入試管,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘;3、配適量凍存液(為含10%二甲亞砜(DMSO),10%FBS的DMEM培養(yǎng)液);4、棄上清,每管加入1ml凍存液,吹打成細(xì)胞懸液(只要使ES細(xì)胞分散成3—5個(gè)細(xì)胞的小團(tuán)塊即可),轉(zhuǎn)入凍存管,作好標(biāo)簽;5.放入程序凍存盒內(nèi)24小時(shí)后轉(zhuǎn)入液氮罐中凍存。相關(guān)產(chǎn)品信息:凍存管,凍存盒,管鼓蓋,加樣槽,PCR板,PCR管架,Sigma現(xiàn)貨,Abcam抗體,GE試劑,Amresco試劑
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2012-94
1、準(zhǔn)備凍存管、凍存盒放置需液氮中保存的樣品。2、液氮中有三個(gè)取液氮容器,不宜直接將凍存管放于液氮罐中,這樣會(huì)使凍存管漂浮起來。固可用紗布、棉線將取氮容器口封住,保存樣品。3、取樣品時(shí),需要使用研缽。研缽在使用前,需清洗,并用純酒精灼燒以充分滅菌。在研磨液氮保存的樣品時(shí),需加入液氮,迅速研磨,待組織變軟,再加少量液氮,再研磨。如此三次??捎孟具^的鑰匙將研缽中的組織樣品轉(zhuǎn)入EP管中。介于所取的樣品不能*轉(zhuǎn)移到EP管中,故而在取樣時(shí)需多取樣品,以免不夠。4、新買的液氮罐需用一定...
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