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當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章Swant抗體的制備工藝要求

Swant抗體的制備工藝要求

更新時(shí)間:2025-11-14點(diǎn)擊次數(shù):461
  Swant抗體的制備工藝要求涉及多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié),包括抗原設(shè)計(jì)與免疫、雜交瘤技術(shù)、抗體純化與質(zhì)控等。以下是具體分析:
  1.抗原設(shè)計(jì)與免疫
  抗原選擇:Swant抗體針對(duì)特定鈣結(jié)合蛋白(如Parvalbumin)設(shè)計(jì),需確??乖母呒兌龋?gt;90%)和特異性。例如,其單克隆抗體通過(guò)識(shí)別人源PV蛋白C端121-132氨基酸序列實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)結(jié)合。
  動(dòng)物免疫:選用小鼠或豚鼠作為宿主動(dòng)物,免疫時(shí)需加入福氏佐劑以增強(qiáng)抗原性,并通過(guò)皮下或背部多點(diǎn)注射延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的存留時(shí)間。
  2.細(xì)胞融合與篩選
  雜交瘤技術(shù):將免疫后的動(dòng)物脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,形成既能無(wú)限增殖又能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。此過(guò)程需嚴(yán)格無(wú)菌操作,并使用HAT培養(yǎng)基篩選成功融合的細(xì)胞。
  克隆化與驗(yàn)證:通過(guò)有限稀釋法實(shí)現(xiàn)單克隆化,并利用ELISA、免疫組化等方法檢測(cè)抗體特異性。例如,Swant的抗PV單抗經(jīng)WB/IHC雙重驗(yàn)證,確保無(wú)交叉反應(yīng)。
  3.Swant抗體純化與質(zhì)控
  層析工藝:采用Protein A親和層析捕獲抗體,結(jié)合離子交換和凝膠過(guò)濾層析進(jìn)一步去除宿主細(xì)胞蛋白(HCP)、DNA殘留及聚集體。最終產(chǎn)品純度需>95%。
  病毒清除:通過(guò)低pH孵育(pH 3.0–4.0)和除病毒過(guò)濾器組合,確保脂包膜病毒的安全性。
  穩(wěn)定性保障:成品需在-20℃避光保存,活性維持>90%長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月。加速穩(wěn)定性試驗(yàn)驗(yàn)證其耐受溫度波動(dòng)的能力。
  4.分裝與定制服務(wù)
  凍干處理:部分產(chǎn)品以凍干形式分裝(如100μl/支),重構(gòu)后用于實(shí)驗(yàn),避免防腐劑干擾。
  靈活規(guī)格:提供50μg試銷裝及標(biāo)記服務(wù)(HRP/FITC/Cy3),滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。
 

 

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